Cromatografía de interacción hidrofóbica dependiente de calcio: una técnica para purificar proteínas de unión al calcio basada en interacciones hidrofóbicas
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:22 min. • July 8th, 2025
La cromatografía de interacción hidrofóbica dependiente de calcio es una técnica para separar las proteínas de unión al calcio de otras proteínas no unidas al calcio en una muestra.
Para comenzar, tome una columna de cromatografía preensamblada que contenga una matriz de perlas de agarosa reticuladas derivadas con grupos fenilo hidrofóbicos para facilitar las interacciones con las proteínas objetivo. Equilibrarlo con un tampón de unión que contenga una concentración muy alta de iones de calcio para una máxima interacción entre la resina y la proteína diana durante la carga posterior de la muestra.
Tome una muestra que contenga la mezcla de proteínas dializadas y complétela con una concentración igual de cloruro de calcio que la utilizada en el tampón de unión para el equilibrio de la columna. Esto maximiza la unión de proteínas a la columna.
Los iones de calcio se unen a proteínas específicas en el lisado, induciendo un cambio conformacional en estas moléculas de proteínas exponiendo sus regiones hidrofóbicas.
Filtrar la mezcla para separar las impurezas y los agregados para evitar que obstruyan la columna. Cargue este filtrado en la columna preequilibrada. Las proteínas con region
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