Purificación de baculovirus basada en cromatografía de afinidad con heparina: una técnica para aislar baculovirus del sobrenadante de células de insectos

Los baculovirus, virus de ADN bicatenario, están rodeados por una envoltura que contiene las principales glicoproteínas virales, como GP64.

Para aislar baculovirus de un sobrenadante de cultivo celular que contiene desechos celulares y proteínas contaminantes, ensamble una columna de cromatografía de afinidad de heparina que contenga una matriz de perlas de agarosa reticuladas. Estas perlas están acopladas a la heparina, un polisacárido lineal con grupos sulfato, que imparten una carga negativa a la cadena de heparina.

Equilibre la columna con un tampón de lavado que tenga un pH neutro y una fuerza iónica óptima para proporcionar condiciones favorables para las interacciones máximas de baculovirus y heparina durante la carga de sobrenadante. Cargue el sobrenadante que contiene baculovirus en la columna.

Los aminoácidos básicos del baculovirus GP64 facilitan las interacciones electrostáticas inespecíficas con la heparina cargada negativamente y se unen firmemente a la columna, a diferencia de los contaminantes que se unen sin apretar. Enjuague la columna con un tampón de lavado, eliminando las proteínas contaminantes y los desechos no unidos y sueltos.

Pase un tampón de elución con