Cromatografía de intercambio catiónico: una técnica para aislar la proteína recombinante diana del lisado de células de insectos basada en la carga superficial neta
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:33 min. • July 8th, 2025
La cromatografía de intercambio catiónico facilita la separación de proteínas de las mezclas en función de su carga superficial neta.
Para el aislamiento de proteínas del transductor de señales diana del lisado de proteínas de células de insectos, obtenga un lisado de proteínas diana dializado que contenga otras proteínas contaminantes. Agregue tampón que contenga cloruro de sodio para reducir la viscosidad del lisado y mejorar la solubilidad de las proteínas, lo que ayuda a prevenir la obstrucción de la columna cromatográfica durante la ejecución.
Además, el pH amortiguador por debajo del punto isoeléctrico de la proteína diana, pI, en el que la proteína tiene carga neta cero, facilita la unión del exceso de iones de hidrógeno a grupos carboxilato negativos, lo que hace que la proteína diana se cargue positivamente.
Ensamble la columna cromatográfica que contiene perlas de agarosa reticuladas acopladas a grupos cargados negativamente. Agregue tampón de unión para equilibrar la columna y maximizar las interacciones columna-proteína. Cargue el lisado diluido en la columna equilibrada.
Las proteínas diana con carga más positiva interactúan y se unen estrechamente a los grupos cargado
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos