Cromatografía líquida de interacción hidrofílica: una técnica para separar analitos polares hidrófilos utilizando perlas hidrofílicas

La cromatografía líquida de interacción hidrofílica, HILIC, es una técnica para separar compuestos polares hidrófilos en función de su grado de polaridad. Comience configurando una columna HILIC llena de perlas hidrofílicas que transportan grupos funcionales polares.

Primero, acondicione la columna usando un tampón de equilibrio y una fase móvil, una mezcla de solvente orgánico y agua. Las moléculas tampón estabilizan el pH, mientras que el disolvente orgánico satura la columna. Las moléculas de agua se inmovilizan y crean una capa acuosa sobre las perlas hidrofílicas.

Cargue la muestra que contiene una mezcla de glicanos (compuestos polares hidrófilos) marcados con una etiqueta fluorescente. Pase la muestra utilizando un gradiente de fase móvil a través de la columna a un caudal óptimo.

A medida que la muestra se mueve a lo largo de la fase móvil hidrofóbica, los glicanos migran a la capa acuosa, dejando atrás las impurezas. Posteriormente, los glicanos se mueven hacia los grupos funcionales polares en las perlas. Aquí, los glicanos más polares se unen fuertemente, mientras que los menos polares se unen sin apretar.

A medida que disminuye la hidrofobicidad de la fase móvil, los gl