Separación de vesículas extracelulares bacterianas basadas en cromatografía de exclusión por tamaño: una técnica para separar poblaciones heterogéneas de vesículas de membrana externa bacterianas gramnegativas en función de su tamaño

En condiciones de cultivo adecuadas, las bacterias gramnegativas liberan vesículas de membrana externa que transportan carga, u OMV, en el sobrenadante. Estas vesículas son estructuras esféricas, pequeñas y de tamaño heterogéneo, que median la comunicación celular.

Para fraccionar subpoblaciones de OMV de diferentes tamaños, tome una columna de cromatografía de exclusión por tamaño vacía con un filtro apropiado en su base para soportar la matriz.

Empaque la columna con una matriz de filtración de gel que consiste en perlas esféricas químicamente inertes de tamaño de poro definido, lo que garantiza que el tamaño sea óptimo para excluir la entrada de OMV de gran tamaño. Equilibre la columna con un tampón adecuado para evitar que las perlas se sequen para una purificación óptima.

Cargue el sobrenadante de cultivo bacteriano que contiene subpoblaciones de diferentes tamaños de OMV, agregados de proteínas y ácidos nucleicos en la parte superior de la columna. Deje que las muestras corran por la fuerza de la gravedad.

A medida que las muestras pasan a través de la columna, los OMV más grandes que no pueden ingresar a los poros, se mueven a través de los espacios entre partículas entre la