Cromatografía de exclusión por tamaño con detección de fluorescencia: una técnica para identificar la integridad de las proteínas de membrana fluorescentes tras la solubilización con detergente

Las proteínas de membrana integral bacteriana, ancladas a las membranas de bicapa lipídica, facilitan el transporte de moléculas a través de las membranas y la transducción de señales. Para estudios estructurales, las proteínas recombinantes integrales de membrana específicas se sobreexpresan con proteína fluorescente verde fusionada, GFP.

Para evaluar la estabilidad de las proteínas de membrana recombinantes después de la solubilización con detergente, obtenga una fracción de membrana bacteriana que contenga proteínas integrales de membrana marcadas con GFP. Agrega un detergente no iónico. Más allá de la concentración crítica, el detergente forma micelas.

Las micelas interactúan con las membranas lipídicas y las proteínas de la membrana, solubilizando las membranas y formando complejos proteína-detergente. Además, las regiones transmembrana hidrofóbicas de las proteínas de membrana pueden permanecer desenmascaradas, lo que provoca la agregación de proteínas. Además, las GFP libres pueden resultar debido a la degradación de las proteínas de membrana.

Centrifugar la mezcla. Recoja el sobrenadante que contiene la fracción solubilizada de detergente.

Ensamble una columna de cromatogra