Cromatografía de afinidad basada en DFE: una técnica para la purificación de anticuerpos monoclonales 2F5 a partir de una muestra cruda utilizando condiciones de elución basadas en alta fuerza iónica

El epítopo DFE o DsRed-2F5 es una proteína de fusión recombinante que comprende DsRed, una proteína fluorescente, y el epítopo 2F5, un segmento del antígeno de la glicoproteína de la envoltura del VIH-1. Este epítopo tiene una alta afinidad por su paratopo, una región en la región determinante de complementariedad en el anticuerpo monoclonal 2F5.

Para purificar los anticuerpos monoclonales 2F5 de una muestra cruda, tome una columna llena de perlas de resina porosa que contengan ligandos de afinidad DFE inmovilizados en su superficie. Enjuague la columna con un tampón de equilibrio adecuado para mantener el pH y evitar interacciones no específicas entre los componentes de la muestra y la resina en los pasos posteriores.

Cargue la muestra que contiene los anticuerpos monoclonales 2F5 diana en la columna. Gradualmente, los anticuerpos de la muestra comienzan a fluir a través de la columna o la fase estacionaria.

Durante el flujo, los anticuerpos interactúan de forma reversible con los ligandos de afinidad DFE inmovilizados en la fase estacionaria. En estas interacciones, el paratopo del anticuerpo 2F5 se une específicamente a su epítopo complementario en el ligando DFE.

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