Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:16 min. • July 8th, 2025
Los fosfolípidos son lípidos complejos que contienen grupos fosfato. Estas moléculas son hidrolizadas por una enzima llamada fosfolipasa.
Para realizar el ensayo de actividad de fosfolipasa, tome una emulsión de yema de huevo rica en fosfolípidos, que actúan como sustrato para la enzima. Agregue la yema a una solución tibia de agarosa que contenga cloruro de sodio, lo que mejora la estabilidad de las proteínas de la yema durante los pasos posteriores.
Complemente la mezcla con cloruro de calcio y un tinte fluorescente: rodamina. Vierta la mezcla en una placa de Petri. Tras la solidificación, los fosfolípidos de la yema permanecen distribuidos homogéneamente en la matriz de gel de agarosa.
Con un tubo, cree pocillos adecuadamente distanciados en el gel. Agregue concentraciones variables de extracto de proteína cruda que contenga fosfolipasa a los pocillos. Incube la placa a temperatura fisiológica.
La fosfolipasa del extracto se difunde radialmente en el gel. Los iones de calcio en el gel se unen a la fosfolipasa, activando las enzimas. Esta enzima escinde los fosfolípidos, generando ácidos grasos libres. Las moléculas de rodamina en el gel forman un complejo con los ácidos grasos l
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