Ensayo de quiralidad celular con micropatrones en forma de anillo: una técnica in vitro para determinar la quiralidad multicelular basada en la alineación celular en micropatrones en forma de anillo

Para determinar la quiralidad de las células de mamíferos in vitro, el sesgo izquierda-derecha de las células para alinearse en una orientación hacia la izquierda o hacia la derecha en condiciones de confinamiento, comience con portaobjetos recubiertos de oro fabricados a medida en una placa de múltiples pocillos que contenga medios. Los portaobjetos comprenden micropatrones de islas en forma de anillo de fibronectina promotora de la adhesión celular, rellenas con monocapa autoensamblada resistente a la adhesión celular.

A continuación, siembre un volumen apropiado de suspensión de células de mamíferos en los portaobjetos e incube. Las células se adsorben en los micropatrones de anillo que contienen fibronectina. La monocapa autoensamblada circundante evita la unión celular no específica fuera de los límites del anillo.

Reemplace el medio, eliminando las celdas sueltas, con medios nuevos. Agregue un fármaco que interfiera con la actina a un conjunto de portaobjetos e incube.

Las células adheridas proliferan, se extienden y asumen la forma de las islas de fibronectina subyacentes, mientras reorganizan sus fibras de actina en respuesta a las señales espaciales, que confinan la monoca