Ensayo de captación de vesículas extracelulares: un método para visualizar y cuantificar la captación celular de vesículas extracelulares mediante la técnica de imágenes de fluorescencia 3D

Para facilitar la comunicación celular, las células secretan vesículas extracelulares, EV, estructuras de tamaño nanométrico encerradas por una membrana lipídica. Los vehículos eléctricos transportan diversas cargas biológicas, incluidas macromoléculas y metabolitos, para entregarlos a las células receptoras.

Para visualizar la captación de VE por parte de las células mediante microscopía confocal, primero, tome VE recién aislados. Estos EV están premarcados con anticuerpos unidos a una sonda fluorescente para su posterior fácil visualización.

Agregue un volumen adecuado de EV marcados con fluorescencia a un cultivo celular receptor adherente. Incubar durante el período deseado. Durante la incubación, una subpoblación de las VE marcadas se adhiere superficialmente a la superficie celular, mientras que otras VE se internalizan.

Agregue un tinte fluorescente diferente para etiquetar el citoplasma celular, lo que ayuda a distinguir las EV internalizadas de las adheridas a la célula receptora. Coloque las células bajo un microscopio confocal y obtenga imágenes en diferentes planos focales a lo largo del eje z, adquiriendo una serie de secciones ópticas a lo largo del grosor de la muest