Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:46 min. • July 8th, 2025
Los osteoclastos, macrófagos multinucleados, facilitan la reabsorción ósea: la descomposición del tejido óseo y la liberación de minerales óseos.
Para cuantificar la reabsorción de osteoclastos in vitro, cultivar células mononucleares de sangre periférica humana en el factor estimulante de colonias de macrófagos, M-CSF, que contiene medios para la diferenciación en células progenitoras de osteoclastos y su adhesión. Cosecha los progenitores de osteoclastos y centrifuga.
Pipetee la suspensión celular resuspendida en un medio, suplementado con M-CSF y activador del receptor del ligando del factor nuclear kappa-Β, RANKL, en pocillos de placas de pocillos múltiples recubiertos con fosfato de calcio, imitando el componente óseo inorgánico. M-CSF y RANKL causan diferenciación de progenitores de osteoclastos y fusión en osteoclastos, activando la reabsorción.
Los osteoclastos activados se adhieren al recubrimiento de fosfato de calcio, reorganizando su citoesqueleto para formar una zona de sellado rica en actina, y desarrollan bordes ondulados, que secretan protones e hidrolasas ácidas. El ambiente ácido resultante disuelve el recubrimiento de fosfato de calcio, liberando iones de calcio
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