Ensayo de bicapa lipídica soportada esférica: una técnica para observar el ensamblaje de septinas en microesferas

Las septinas son proteínas citoesqueléticas clave que se unen a las superficies curvas de la membrana plasmática.

Para observar el ensamblaje de septina in vitro en microesferas, primero, tome una suspensión de perlas de sílice microscópicas de tamaño uniforme, que actúan como soporte sólido para la formación de bicapas. Agite esta suspensión para romper cualquier grupo de cuentas.

Complételo con pequeñas vesículas unilamelares, SUV: vesículas esféricas rodeadas por una sola bicapa lipídica. Incubar con agitación constante, evitando que las microesferas se asienten.

Durante la incubación, los grupos de cabezas polares externas facilitan la adsorción de SUV en la superficie de la microesfera hidrofílica. Esta interacción hace que los SUV se rompan, seguida de la fusión de los lípidos de los SUV en la superficie curva de la microesfera como una capa continua, lo que da como resultado una formación de bicapa lipídica esférica y soportada, SLB.

Lavar para eliminar el exceso de lípidos no unidos y volver a suspender en tampón de reacción. Transfiera la suspensión esférica de SLB a una pequeña región de una superficie recubierta de polietilenglicol, para evitar adsorciones inespecíficas.