Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:12 min. • July 8th, 2025
La eliminación de proteínas mal plegadas en la célula está regulada principalmente por el sistema celular ubiquitina-proteasoma, en el que la proteína es reconocida y etiquetada por primera vez por ubiquitina, una pequeña proteína reguladora, y traficada al proteasoma, un complejo multiproteico, para su hidrólisis y eliminación.
La alteración de la actividad del sistema ubiquitina-proteosoma, una ocurrencia común en enfermedades neurodegenerativas, puede hacer que las proteínas mal plegadas se acumulen dentro de las células, formando agregados de proteínas insolubles con efectos citotóxicos.
Para visualizar y cuantificar la agregación de proteínas in vitro, obtenga una suspensión de células de mamíferos transducidas, que expresan una proteína mutante marcada con fluorescencia que adopta una conformación mal plegada con residuos hidrófobos expuestos, en medios adecuados.
Pipetee concentraciones crecientes de un inhibidor del proteasoma en los pocillos de una placa negra de pocillos múltiples para minimizar la fluorescencia de fondo durante la obtención de imágenes. Siembre la suspensión de células de mamíferos en los pocillos. Incubar para permitir que las células se adhieran al fon
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