Ensayo de actividad de endotoxinas: un bioensayo basado en quimioluminiscencia para investigar la actividad de endotoxinas en muestras de sangre
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:25 min. • July 8th, 2025
En las bacterias gramnegativas, las endotoxinas de lipopolisacáridos son componentes vitales de la membrana externa bacteriana.
Estructuralmente, una endotoxina está compuesta por el antígeno O, la cadena de polisacáridos más externa conectada a través de un núcleo central al lípido A, un glicolípido inmunoestimulante crucial para la actividad de la endotoxina.
Para investigar la actividad de las endotoxinas, tome un tubo de ensayo con un tampón adecuado que contenga anticuerpos antilipídicos A, zymosan, un activador de neutrófilos exógenos, y luminol, un agente quimioluminiscente.
Suspender un volumen óptimo de una muestra de sangre infectada que comprenda endotoxinas y células sanguíneas, incluidos los neutrófilos. Incube el tubo en condiciones fisiológicas.
Durante la incubación, el anticuerpo antilípido A reconoce el componente lipídico-A de la endotoxina y se une a él a través de dominios de unión al antígeno, lo que da como resultado la formación de un complejo anticuerpo-endotoxina.
El dominio FC del anticuerpo unido a endotoxinas se une al receptor complementario de los neutrófilos, presentando las endotoxinas unidas a los neutrófilos. Esta unión actúa como un estímulo de c
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