Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:38 min. • July 8th, 2025
La endotoxina, una toxina bacteriana gramnegativa presente en la membrana externa, es un lipopolisacárido, LPS, compuesto principalmente por lípidos y polisacáridos, incluidos los lípidos A y el antígeno O. Cuando se libera durante la infección, es reconocido por el sistema inmunológico, desencadenando respuestas inflamatorias basadas en citoquinas.
Para estimar la contaminación por endotoxinas en una nanoformulación de fármacos liposomales utilizando el lisado de amebocitos de Limulus, ensayo LAL, prepare tubos de reacción, uno que contenga el fármaco y el otro que contenga el fármaco enriquecido con una concentración de endotoxinas conocida.
Agregue reactivo LAL que contenga lisado de proteínas obtenido de cangrejo herradura, Limulus polyphemus, células sanguíneas o amebocitos. El lisado incluye serina proteasas inactivas (factor B, factor C, enzima procoagulante) y una proteína de coagulación en gel, coagulógeno.
Agite los tubos y cárguelos en un turbidímetro para medir la turbidez de las soluciones.
En presencia de LPS contaminantes unidos a fármacos liposomales, el factor C sensible al LPS se activa autocatalíticamente, que luego escinde y activa el factor B que convierte la e
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