Ensayo de lisado de amebocitos de Limulus con coágulo de gel: un método para la detección de endotoxinas bacterianas en formulaciones de nanopartículas

La membrana externa de las bacterias Gram-negativas contiene endotoxinas llamadas lipopolisacáridos o LPS. El LPS tiene una porción de oligosacárido hidrófilo y una región de lípidos A hidrofóbicos.

Una vez dentro del huésped, las proteínas de unión a LPS reconocen las endotoxinas. Estas proteínas luego se unen a los receptores en las células inmunes circulatorias. Esta unión activa las células inmunitarias, que liberan factores inflamatorios. La sobreproducción de estos factores exagera la respuesta inmune, causando la muerte celular.

Para detectar endotoxinas utilizando el lisado de amebocitos de Limulus, o ensayo LAL, tome una formulación que contenga endotoxinas unidas a la superficie lipofílica de las nanopartículas a través de sus porciones hidrofóbicas de lípido A.

Agregue el reactivo LAL al tubo. Este reactivo es un lisado acuoso que contiene enzimas y proteínas inactivas derivadas de los amebocitos, células sanguíneas del cangrejo herradura.

Incubar el tubo para facilitar la unión de endotoxinas a la proenzima proenzima del factor de coagulación C inactivo derivado del lisado, activándola autocatalíticamente.

El factor C activado escinde otra proenzima, el factor B, forman