Ensayo de cribado enzimático basado en hidrogel de polímero cromogénico: un método de alto rendimiento para cribar las enzimas activas en carbohidratos utilizando sustratos sintéticos

Las enzimas que degradan los carbohidratos descomponen los polisacáridos complejos en oligosacáridos más pequeños.

Para detectar la actividad de degradación de la enzima, comience tomando múltiples hidrogeles de polímeros cromogénicos, CPH, que se preparan teñiendo polisacáridos con colorantes de clorotriazina de diferentes colores. Luego, cada polisacárido se reticula químicamente para formar hidrogel, un sustrato sintético para la degradación enzimática.

Ahora, dispense diferentes sustratos de CPH en distintos pocillos de una placa de reacción porosa. Agregue una solución de activación e incube para garantizar una activación óptima de los sustratos.

Coloque la placa de ensayo sobre una placa de producto vacía. Centrifugar las placas juntas a baja velocidad para facilitar la eliminación eficiente de la solución de activación a través de los poros de la placa de reacción.

A continuación, complemente todos los pocillos de la placa de reacción con el mismo tipo de enzima degradadora de carbohidratos en un tampón adecuado que mantenga un pH óptimo para la actividad enzimática. Selle la placa e incube con agitación suave para permitir una distribución uniforme de las enzimas en la red