Cribado de enzimas basadas en biomasa cromogénica insoluble: un ensayo para evaluar la actividad de degradación de las enzimas degradadoras de biomasa vegetal

La biomasa es una materia orgánica derivada de plantas compuesta principalmente por polisacáridos complejos. Las enzimas degradadoras de carbohidratos actúan sobre estos polisacáridos para producir oligosacáridos más pequeños.

Para evaluar la actividad de degradación de una enzima, comience tomando diferentes sustratos de biomasa cromogénica insoluble: ICB presentes en los pocillos de una placa de reacción porosa. Estos sustratos se obtienen a partir del teñido de materiales derivados de plantas con un colorante de clorotriazina de color específico. La biomasa resultante tiene polisacáridos complejos marcados con colorante que sirven como sustrato para la actividad enzimática.

Ahora, agregue una solución tampón que contenga una enzima hidrolizadora de carbohidratos. El tampón mantiene el pH para una actividad enzimática óptima. Coloque la placa de reacción en un agitador e incube. La agitación constante permite que las moléculas de la enzima alcancen el polisacárido objetivo en el sustrato ICB.

Durante la incubación, la enzima hidrolizadora escinde los enlaces glucosídicos covalentes dentro de los polisacáridos de cadena larga. La reacción produce oligosacáridos solubles unidos a m