Ensayo de unión a anexina V: una técnica basada en fluorescencia para identificar eritrocitos apoptóticos mediante el marcaje con fosfatidilserina

Durante ciertas condiciones patológicas, los eritrocitos o glóbulos rojos experimentan una contracción celular acompañada de la translocación del fosfolípido de membrana - fosfatidilserina - de la valva de la membrana interna a la externa, lo que lleva a la muerte celular programada, eriptosis, desencadenando la fagocitosis celular mediada por macrófagos.

Para medir la eriptosis inducida por ionóforos en una población aislada de eritrocitos humanos mediante un ensayo de unión a la anexina V, comience con eritrocitos suspendidos en un tampón libre de glucosa.

El agotamiento de la glucosa induce estrés celular, activando la proteína quinasa C citosólica, que posteriormente activa los canales de calcio y provoca la afluencia de iones de calcio. Además, los canales de potasio se activan, lo que provoca la salida de potasio y la contracción celular.

A continuación, agregue ionóforo de calcio que forma un complejo estable con iones de calcio extracelulares. El complejo facilita la entrada citosólica de iones de calcio a través de la membrana celular, aumentando aún más la concentración de calcio intracelular. Esto, a su vez, activa la escramblasa, un transportador bidireccional de fosfol