Ensayo de depleción de glucosa in vitro: un método basado en fluorescencia para cuantificar la absorción de glucosa celular a través de la medición de la depleción de glucosa extracelular
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 5:52 min. • July 8th, 2025
La glucosa, una fuente primaria de energía celular, ingresa a las células a través de las proteínas transportadoras de glucosa de la membrana celular. La glucosa se descompone en el citoplasma celular en piruvato, a través de la vía glucolítica, generando energía a través del trifosfato de adenosina, o ATP, para el metabolismo celular.
Para medir la absorción intracelular de glucosa, comience con un cultivo adherente de fibroblastos en una placa de pocillos múltiples. Reemplace el medio con medios sin glucosa e incube. Las células metabolizan la glucosa disponible para producir energía, alcanzando un estado de falta de glucosa.
Reemplace el medio en un conjunto de pocillos con medios sin glucosa que contengan insulina, un estimulador de la captación de glucosa y desoxiglucosa fluorescente, un análogo de la glucosa. Trate otro conjunto de pocillos con medios sin glucosa que contengan desoxiglucosa fluorescente.
Durante la incubación, la insulina estimula la translocación de transportadores de glucosa adicionales a la membrana plasmática, lo que facilita una mayor captación de desoxiglucosa fluorescente, en ausencia de glucosa.
La desoxiglucosa es fosforilada y no metabolizada por la
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