Medición de la depleción de análogos de glucosa fluorescentes extracelulares: una técnica de medición sustitutiva para evaluar la absorción de glucosa en órganos de ratón ex vivo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:04 min. • July 8th, 2025
En los tejidos, la glucosa extracelular ingresa a las células a través de una difusión facilitada a través de transportadores de glucosa específicos.
La glucosa se descompone en piruvato en el citoplasma celular a través de la glucólisis, una vía metabólica, que genera energía en forma de trifosfato de adenosina, o ATP, para los procesos metabólicos celulares.
Para medir la absorción de glucosa ex vivo, comience con tejido hepático de ratón de tamaño pequeño recién cosechado. Agregue un tampón adecuado para mantener las condiciones fisiológicas.
A continuación, transfiera el tejido a una placa de pocillos múltiples que contenga medios libres de glucosa. Siga la incubación en medios sin glucosa suplementados con desoxiglucosa, un análogo de glucosa marcado con fluorescencia. El pequeño tamaño del tejido permite la entrada de desoxiglucosa.
La desoxiglucosa ingresa a las células a través de transportadores de glucosa, en ausencia de glucosa. Dentro de las células, la desoxiglucosa sufre fosforilación pero no se metaboliza más, lo que lleva a su acumulación.
Recoja los medios que contienen desoxiglucosa marcada con fluorescencia no utilizada en los puntos de tiempo deseados. Usando un
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