Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:39 min. • July 8th, 2025
La miosina, una proteína motora, tiene un dominio de cabeza globular que interactúa con la actina, una proteína filamentosa. Esta interacción es esencial para la translocación de miosina a lo largo de los filamentos de actina. Para estudiar esta unión in vitro, realice un ensayo de motilidad invertida de miosina sobre actina atada a la superficie.
Para comenzar, ensamble una cámara de ensayo colocando un cubreobjetos recubierto de polietilenglicol biotinilado - PEG sobre un portaobjetos de microscopio de modo que la superficie recubierta mire hacia el interior, creando la parte superior de la cámara.
Pase una solución que contenga avidina, una glicoproteína, a través de la cámara. La avidina se une a la biotina con alta afinidad, lo que mejora la adhesión de la actina. A continuación, fluya en filamentos de actina marcados con biotina marcados con un fluoróforo rojo. El ligando de biotina se une a la avidina, inmovilizando los filamentos en la superficie del cubreobjetos.
Finalmente, agregue proteínas de miosina 5A marcadas con proteína verde fluorescente en un tampón que contenga moléculas de trifosfato de adenosina o ATP. La miosina 5A de doble cabeza, que contiene una cabeza de
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