Ensayo de imágenes con sonda fluorescente: una técnica para visualizar el estrés oxidativo en las células organoides intestinales cultivadas tratadas con inductor de especies reactivas de oxígeno

Los organoides intestinales recapitulan la organización cripta-vellosidades similar al intestino que tiene una luz central que comprende células muertas y desechos. La luz está revestida por células parecidas a vellosidades y protuberancias en ciernes en forma de cripta que albergan células madre.

Las diferentes células organoides producen niveles variables de especies reactivas de oxígeno, ROS, subproductos de actividades metabólicas, cuya acumulación conduce al estrés oxidativo.

Para visualizar el estrés oxidativo en células variadas, comience tomando una placa de pocillos múltiples que contenga organoides 3D cultivados en una matriz basal. Las células madre organoides expresan una proteína de fluorescencia verde o una proteína marcada con GFP que ayuda a distinguirlas durante las imágenes.

Complemente los pozos con terc-butil hidroperóxido, un inductor de ROS, e incube. El inductor activa la NADPH oxidasa unida a la membrana y estimula la producción de ROS dentro de las células. Las células madre, al ser metabólicamente activas, producen más ROS que las células diferenciadas.

Agregue sondas fluorogénicas sensibles a ROS. Estas sondas lipofílicas ingresan rápidamente a las célula