Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:29 min. • July 8th, 2025
Las células intestinales producen especies reactivas de oxígeno: ROS. Los niveles moderados de ROS mantienen la homeostasis celular, mientras que los niveles altos de ROS pueden causar la muerte celular.
Para cuantificar los niveles de ROS in vitro, comience con un cultivo de organoides intestinales 3D de ratón. Estos organoides exhiben una arquitectura de epitelio intestinal con protuberancias en forma de cripta que albergan células madre que expresan fluorescencia verde. También contienen células diferenciadas similares a vellosidades en la periferia, que rodean la luz central que comprende células muertas y desechos. Todas estas células producen diferentes niveles de ROS.
Ahora, trate los organoides en los pocillos designados con moduladores ROS. Según su naturaleza, los moduladores pueden actuar como inductores o inhibidores de ROS. Después de incubar durante el tiempo requerido, retire el medio gastado.
Agregue una enzima proteolítica al cultivo, interrumpiendo la arquitectura 3D de los organoides y liberando diferentes células en suspensión. A continuación, agregue una sonda fluorogénica sensible a ROS e incube.
Al ingresar a las células, las sondas reaccionan con ROS y se ox
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