Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 6:00 min. • July 8th, 2025
La SUMOilación ocurre debido a la unión de pequeños modificadores similares a la ubiquitina, SUMO, a las proteínas sustrato.
La sumoilación ocurre cuando un péptido SUMO maduro es activado por una enzima - E1. Tras la activación, el SUMO se transfiere al sitio activo de la enzima conjugadora, E2, uniendo el SUMO al residuo de lisina de la proteína sustrato. Otra ligasa, E3, mejora la eficiencia de esta interacción.
Para realizar un ensayo de SUMOilación in vitro, comience con un tubo que contenga una mezcla de la proteína sustrato - p53, enzimas y péptidos SUMO, e incube para inducir la SUMOilación. Complemente el tubo con dodecil sulfato de sodio, tampón que contiene SDS, terminando la reacción. Caliente la muestra para desnaturalizar las proteínas.
Cargue la mezcla de proteínas en el pocillo de un gel SDS-PAGE y realice una electroforesis. Las proteínas SUMOiladas de mayor peso molecular se mueven más lentamente que sus variantes no SUMOiladas, generando dos bandas distintas.
Transfiera el gel a una membrana secante presente en un papel de filtro húmedo en un aparato de electrotransferencia. Cubra con un papel de filtro húmedo y transfiera eléctricamente las proteínas del gel a l
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