Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:59 min. • July 8th, 2025
Las proteínas nucleares mal plegadas que carecen de una estructura terciaria definida se marcan con pequeños modificadores similares a la ubiquitina, SUMO, y moléculas de ubiquitina, que facilitan su degradación por el sistema proteolítico, incluido el sistema ubiquitina-proteasoma, el UPS.
En varias enfermedades neurodegenerativas, la disfunción del UPS provoca la acumulación y agregación de proteínas nucleares mal plegadas, lo que conduce a la muerte neuronal.
Para investigar la tasa de degradación de proteínas nucleares mal plegadas in vitro, trate un cultivo de células de mamíferos adherentes con una mezcla que comprende un ADN plásmido que codifica proteínas mal plegadas marcado con fluorescencia y un reactivo de transfección.
Las células transfectadas con éxito expresan proteínas mal plegadas marcadas con fluorescencia y de corta vida media marcadas con una señal de localización nuclear. Tras el transporte al núcleo, estas proteínas mal plegadas sufren SUMOilación y ubiquitinación y se transfieren al UPS para su degradación y eliminación de proteínas.
Después de la incubación, reemplace el medio con un medio de baja fluorescencia que contenga cicloheximida. La cicloheximida,
Vea la transcripción completa y acceda a miles de videos científicos