El ensayo de luciferasa: un ensayo de alto rendimiento para medir señales luminiscentes utilizando bioreporteros basados en sistemas de nanoluciferasa de ingeniería
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:36 min. • July 8th, 2025
La luciferasa es una enzima que oxida su sustrato para formar un producto bioluminiscente.
Esta propiedad de la luciferasa es útil para diseñar un sistema reportero basado en nanoluciferasa en el que se utiliza la versión dividida de la enzima. En este sistema, los fragmentos más pequeños y más grandes poseen una alta afinidad de unión entre sí y pueden reconstituir la enzima funcional.
Para utilizar el sistema basado en nanoluciferasa para detectar la proteína diana, el dominio de unión al receptor de la glicoproteína de pico del SARS-CoV-2, comience con una placa de cultivo que contenga células adherentes. Estas células contienen un plásmido que codifica la proteína diana junto con una secuencia específica para el fragmento más pequeño de nanoluciferasa modificada.
Tras la expresión, las células cultivadas producen bioreporteros, proteínas diana recombinantes fusionadas con el fragmento más pequeño de la luciferasa. Trate las células con un tampón de lisis e incube bajo agitación. Los componentes del tampón lisan rápidamente las células, liberando el contenido celular, incluidos los bioreporteros, en el sobrenadante.
Transfiera el sobrenadante a una placa de ensayo multipocillos.
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