Ensayo de anticuerpos neutralizantes AAV basado en células: una técnica colorimétrica para detectar anticuerpos neutralizantes contra virus adenoasociados específicos en suero
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:54 min. • July 8th, 2025
Los virus adenoasociados recombinantes, rAAV, virus de ADN monocatenario modificados genéticamente modificados y sin envoltura, son portadores de genes terapéuticos prometedores.
Los rAAV se adhieren a los receptores de la membrana celular diana y se someten a endocitosis mediada por clatrina, lo que facilita la administración nuclear del genoma de rAAV y la expresión génica terapéutica. Sin embargo, los anticuerpos neutralizantes del sistema inmunitario dirigidos contra los rAAV se unen al epítopo específico de rAAV, interfiriendo con la unión a la membrana celular, la entrada celular y la transferencia de genes.
Para detectar anticuerpos neutralizantes contra rAAV específicos en suero de oveja, primero, obtenga concentraciones adecuadas de suero diluido. Agregue AAV recombinantes que expresen el gen de la fosfatasa alcalina placentaria humana, hPLAP. Permita que los anticuerpos neutralizantes se unan y neutralicen los AAV.
Transfiera esta mezcla a los pocillos de una placa de pocillos múltiples que contenga un cultivo de células epiteliales humanas adheridas. Tras la incubación, los AAV sufren endocitosis celular. Las células transducidas expresan hPLAP, unido a la membrana celul
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