Ensayo de persistencia in vitro: un método para evaluar el efecto de los osmolitos sobre la persistencia bacteriana

Al exponerse a condiciones ambientales nocivas, un subconjunto de bacterias entra en un estado de baja actividad metabólica, evadiendo los efectos perjudiciales. Estas bacterias, llamadas persistentes, pueden tolerar la exposición transitoria a altas concentraciones de antibióticos.

Para estudiar el efecto de los osmolitos -pequeños solutos orgánicos- sobre la persistencia bacteriana, en primer lugar, se obtiene un cultivo celular bacteriano en fase exponencial con persistentes preexistentes por debajo del límite de detección, suspendidos en medios.

A continuación, transfiera la suspensión a pocillos que contienen osmolitos de una placa de microarrays. Mantenga un conjunto de pocillos sin osmolitos como control. Selle la placa con una membrana permeable al gas para permitir una rápida difusión del gas para el crecimiento celular y la incubación.

Los osmolitos en el medio en concentraciones apropiadas inducen estrés osmótico, lo que hace que algunas células reprogramen su metabolismo celular de crecimiento rápido a lento, formando persistentes.

Ahora, transfiera las células tratadas con osmolitos y de control a una placa de ensayo persistente que contenga antibióticos. Selle la plac