Ensayo de co-incubación bacteriana: una técnica basada en microscopía de fluorescencia para visualizar la competencia bacteriana intraespecífica a nivel de una sola célula
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:55 min. • July 8th, 2025
La competencia intraespecífica entre dos cepas bacterianas hace que la cepa inhibidora libere moléculas efectoras tóxicas que matan a la población objetivo.
Para visualizar las interacciones competitivas entre dos cepas bacterianas gramnegativas, comience con un cocultivo que comprenda un inhibidor y una cepa diana en cantidades iguales.
Ambas cepas están diseñadas para expresar proteínas fluorescentes de diferentes colores para diferenciarlas visualmente durante las imágenes. Concentre el cultivo para maximizar el contacto de célula a célula entre las cepas bacterianas. Detecte el cultivo mixto en un cubreobjetos colocado en el fondo de un plato.
Coloque una almohadilla de agarosa solidificada sobre la mancha, permitiendo que las bacterias se inmovilicen, y cúbrala con otro cubreobjetos. Incubar para permitir el crecimiento bacteriano, simulando condiciones de hacinamiento bacteriano.
La envoltura celular de la cepa inhibidora contiene un sistema secretor especializado: el sistema de secreción tipo seis, o T6SS. Comprende un complejo de membranas, una placa base y un tubo interior rodeado por una vaina contráctil.
Al detectar el contacto, la cepa inhibidora activa su T6SS, lo que
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