Ensayo homogéneo de proximidad luminiscente amplificado: un ensayo de proximidad basado en perlas para cribar moléculas pequeñas que inhiben las interacciones proteína-proteína

En los sistemas biológicos, la proximidad de una proteína a su socio específico es un determinante crucial para una interacción proteína-proteína exitosa. Con pequeñas moléculas inhibidoras presentes, estas proteínas no pueden acercarse unas a otras, interrumpiendo sus interacciones.

Para detectar moléculas inhibidoras que interrumpan las interacciones entre dos proteínas, una chaperona y una co-chaperona, tome una placa de pocillos múltiples que contenga varias moléculas pequeñas. Complemente los pozos con perlas donantes que tengan co-chaperonas adheridas a sus superficies. Estas perlas contienen fotosensibilizadores para el ensayo de quimioluminiscencia.

Agregue una suspensión de perlas aceptoras conjugadas a las secuencias peptídicas derivadas de chaperonas que se unen específicamente a la co-chaperona. Las perlas contienen un tinte a base de tioxeno y fluoróforos esenciales para la visualización.

En pocillos con moléculas no inhibidoras, las altas afinidades entre los péptidos de unión a chaperonas y las cochaperonas atraen las perlas aceptoras y donantes. Mientras que las perlas permanecen distantes cuando los inhibidores están presentes.

Usando un lector de quimioluminiscenc