Marcaje final de dUTP nick mediado por transferasa terminal: ensayo TUNEL: un método in situ para detectar la fragmentación del ADN en células apoptóticas

Las células huésped infectadas por patógenos microbianos sufren apoptosis, muerte celular programada. Durante la apoptosis, las ADNasas degradan el ADN cromosómico en pequeños fragmentos, lo que lleva a la muerte celular.

Para detectar la apoptosis mediante el ensayo TUNEL, tome un portaobjetos de vidrio con una sección de tejido cutáneo desparafinado y rehidratado infectado con un patógeno fúngico.

Tratar el tejido con proteinasa-K para inactivar las ADNasas celulares, evitando que degraden potencialmente el ADN durante el análisis. Agregue peróxido de hidrógeno para enfriar la reacción y lave el portaobjetos para eliminar la proteinasa-K sin reaccionar.

Agregue un tampón que contenga trifosfatos de desoxiuridina marcados con digoxigenina o dUTP. Complételo con una desoxinucleotidiltransferasa terminal, una enzima TdT e incube. En las células apoptóticas, la enzima TdT cataliza la unión de dUTP marcados a los grupos 3'-hidroxilo expuestos del ADN fragmentado.

A continuación, agregue un anticuerpo anti-digoxigenina conjugado con un reportero de rodamina e incube en la oscuridad para facilitar la unión de anticuerpos a dUTP marcados con digoxigenina, impartiendo fluorescencia roja a