Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:48 min. • July 8th, 2025
Los macrófagos son células inmunitarias especializadas que eliminan las células que sufren apoptosis, muerte celular programada por fagocitosis.
Para evaluar el engullimiento de células apoptóticas, comience con un portaobjetos de vidrio que contenga células embrionarias fijas de Drosophila, incluidos los cuerpos apoptóticos engullidos por hemocitos, macrófagos invertebrados.
Primero, trate las células con un reactivo de bloqueo que bloquee los sitios no específicos. Agregue anticuerpos primarios que se unan a los receptores de croquemort, marcadores fagocíticos de los hemocitos. Lave el exceso de anticuerpos.
Agregue anticuerpos secundarios marcados con fosfatasa alcalina que se unan a los anticuerpos primarios. Ahora, agregue una solución de sustrato cromogénico adecuada en el portaobjetos e incube. Durante la incubación, la fosfatasa alcalina reacciona con el sustrato cromogénico para producir gránulos teñidos de púrpura en los hemocitos.
A continuación, agregue una mezcla de reacción que comprenda desoxinucleotidiltransferasa terminal, enzima TdT y nucleótidos unidos a digoxigenina. TdT cataliza la unión de nucleótidos unidos a digoxigenina a los extremos 3' OH expuestos del AD
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