Ensayo de fuga de fluorescencia para estudiar la interacción del péptido que penetra en las células con la membrana

Los péptidos que penetran en las células, los CPP, péptidos cortos cargados positivamente, pueden interactuar y atravesar las membranas celulares, lo que facilita la entrega de cargas impermeables a las células.

Para estudiar el potencial de permeabilización de la membrana de una prueba CPP in vitro utilizando un imitador de membrana celular, comience con una vesícula unilamelar grande, LUV, suspensión.

Los LUV comprenden una bicapa de fosfolípidos cargada con una sonda fluorescente impermeable a la membrana y el par de extinción correspondiente. Dentro de las vesículas, el extintor interactúa con la sonda fluorescente debido a su proximidad, lo que provoca la extinción de la fluorescencia.

Pipetee la suspensión de LUV en una cubeta de fluorescencia de cuarzo y diluya con tampón. Agrega una barra magnética. Transfiera a un espectrofluorómetro con agitación magnética para evitar la sedimentación LUV durante la ejecución. Determine la fluorescencia de fondo para eliminar cualquier fuga de LUV.

Agregue la concentración deseada de CPP a la suspensión de LUV a intervalos regulares.

Basados en la hidrofobicidad y la carga de los residuos de aminoácidos de los CPP, perturban la membrana l