Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 5:09 min. • July 8th, 2025
Para cuantificar el contenido de proteína soluble en un tejido vegetal, en un tubo, comience con una cantidad adecuada de tejido vegetal liofilizado molido.
Agregue hidróxido de sodio, un álcali, al tubo y sonique. El ambiente alcalino con las fuerzas mecánicas altera las células, liberando contenidos intracelulares, incluidas macromoléculas: proteínas solubles y carbohidratos. Incubar a temperaturas más altas.
En presencia de calor, los álcalis causan hidrólisis de proteínas, formando péptidos más pequeños y aumentando la solubilidad de las proteínas. Además, los carbohidratos se degradan.
Centrifugar la mezcla. Recoge el sobrenadante solubilizado que contiene proteínas. Agregue ácido clorhídrico para neutralizar el pH.
Tratar la muestra con ácido tricloroacético, TCA. El TCA interrumpe la capa de hidratación que rodea las proteínas, lo que lleva a la agregación y precipitación de proteínas.
Centrifugar y eliminar el sobrenadante que contiene TCA. Lave el gránulo de proteína con acetona helada para eliminar cualquier TCA residual, que puede interferir con la estimación de proteínas solubles.
Seque la acetona al aire. Vuelva a suspender el gránulo de proteína en hidróxido de sodio.
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