Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 3:34 min. • July 8th, 2025
Toxoplasma gondii, un protozoo unicelular, es un parásito anaeróbico obligado, que se reproduce solo dentro de las células huésped.
Para cuantificar el crecimiento intracelular del parásito utilizando un ensayo basado en luciferasa, tome una suspensión de células del parásito que expresan luciferasa, una enzima que produce luminiscencia al reaccionar con su sustrato. Agregue la suspensión a un cultivo de fibroblastos del prepucio humano e incube durante un tiempo adecuado.
El parásito se une a los receptores de la célula huésped y se internaliza a través de un proceso endocítico, formando una vacuola parasitófora. La estructura proporciona un nicho para que el parásito se reproduzca.
Después de la infección, aspirar el medio, eliminando los parásitos no internalizados. Agregue un tampón de lisis que contenga un detergente y luciferina, un sustrato para la luciferasa. El detergente en el tampón crea poros en la membrana celular y lisa completamente las células, lo que resulta en la liberación de luciferasa.
La enzima liberada oxida las moléculas de luciferina, emitiendo luz. Mida la intensidad de la luminiscencia para determinar la actividad de la luciferasa. Usando pocillos replica
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