Ensayo de β-galactosidasa para evaluar la citotoxicidad inducida por fármacos en parásitos

Trypanosoma cruzi, un parásito intracelular obligado, invade las células huésped de mamíferos como tripomastigote (etapa de desarrollo flagelada y no proliferativa) y se diferencia en amastigotes no flagelados, que proliferan en el citoplasma por fisión binaria.

Después de la proliferación, los amastigotes se diferencian nuevamente en tripomastigotes que interrumpen la entrada en circulación de las células huésped, lo que resulta en una infección sistémica.

Para evaluar el potencial citotóxico in vitro de un fármaco antiparasitario de prueba contra Trypanosoma cruzi, comience con un cultivo de parásitos transgénicos de Trypanosoma cruzi, en la etapa de desarrollo deseada, que expresen de manera estable la enzima β-galactosidasa.

Suspenda los parásitos en medios adecuados. Transfiera a una placa de varios pocillos. Agregue las concentraciones apropiadas del medicamento antiparasitario de prueba. Incubar.

El fármaco se difunde pasivamente a través de las membranas del parásito y se metaboliza en intermedios tóxicos. Estos metabolitos ingresan a los núcleos y causan daño en el ADN, inhibiendo la síntesis de proteínas, incluida la β-galactosidasa, lo que afecta negativamente la viabili