Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:57 min. • July 8th, 2025
En el pez cebra, las partículas finas ambientales, o PM, un contaminante del aire, causan un mal funcionamiento cardíaco inducido por el estrés oxidativo.
Para estudiar el impacto de las PM en el pez cebra, comience por exponer los embriones de pez cebra a la materia orgánica extraíble derivada de PM, EOM, que desencadena la generación de especies reactivas de oxígeno, o ROS.
ROS oxida la base de ADN guanina a 8-hidroxi-2′-desoxiguanosina o 8-OHdG y hace que la fosforilación de la histona H2AX forme γH2AX, un marcador de roturas de doble cadena de ADN.
Después de la exposición, disecciona el corazón del pez cebra y colócalo en un portaobjetos de vidrio. Trate el corazón con una solución fijadora que reticula las proteínas, estabilizando la estructura celular.
A continuación, agregue un reactivo de bloqueo para evitar sitios de unión inespecíficos. Agregue anticuerpos primarios que se dirijan a γH2AX y 8-OHdG en las células cardíacas.
A continuación, agregue dos anticuerpos secundarios marcados con fluorescencia de diferentes colores que se unen específicamente a la región Fc de su respectivo anticuerpo primario. Finalmente, tiñe la muestra con DAPI, una tinción específica de ADN, q
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