Ensayo de muerte neuronal para evaluar la muerte celular en un modelo de epilepsia ex vivo

La epilepsia, convulsiones espontáneas y recurrentes en el cerebro, conduce a la muerte de las células neuronales.

Para estudiar la muerte neuronal en un modelo de epilepsia ex vivo, comience tomando un corte organotípico de corteza rinal-hipocampo, preparado a partir de un cerebro de cachorro de rata, en un medio apropiado.

La rebanada organotípica consiste en la corteza rinal y el hipocampo. Bajo la privación sérica gradual, estas regiones representan eventos epilépticos en evolución, lo que conduce a la muerte neuronal inducida por convulsiones.

Agregue la cantidad requerida de yoduro de propidio, PI, un tinte fluorescente, al cultivo e incube. A través de la membrana celular dañada, PI ingresa a las neuronas muertas y se une al ADN; las neuronas vivas, con la membrana intacta, no son capaces de captar PI.

Coloque la rebanada organotípica en un portaobjetos de microscopio para inmunotinción. Agregue una solución que bloquee la permeabilización e incube.

Las moléculas de detergente en la solución solubilizan los lípidos de la membrana, creando poros en la membrana de las células intactas, haciéndolas permeables para los pasos posteriores de inmunotinción. Las proteínas en la solu