Ensayo de inmunoabsorción enzimática para verificar conjugados anticuerpo-antígeno acoplados químicamente
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:57 min. • July 8th, 2025
Para provocar una respuesta inmune, los antígenos se unen a los anticuerpos que son específicos para los receptores endocíticos presentes en la superficie de las células dendríticas, o DC, las células presentadoras de antígenos, que ayudan en la absorción de antígenos.
La formación de un complejo anticuerpo-antígeno es un paso crucial y se puede lograr in vitro acoplando químicamente el antígeno a un anticuerpo monoclonal dirigido a DC.
Para verificar la eficiencia del proceso de conjugación, comience con una placa ELISA prerecubierta con los anticuerpos capturados. Trate la placa con una solución de bloqueo para evitar la unión inespecífica de los antígenos a la superficie recubierta.
Agregue conjugados anticuerpo-antígeno químicamente reticulados a la placa e incube. El epítopo específico del antígeno interactúa con el paratopo del anticuerpo capturado formando un complejo anticuerpo-antígeno-anticuerpo.
A continuación, superponga la placa con un tercer conjunto de anticuerpos unidos a una enzima. Estos anticuerpos se unen específicamente a los anticuerpos primarios presentes en el conjugado, lo que permite su detección.
Agregue un tampón que contenga el sustrato cromogénico para
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