Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 6:19 min. • July 8th, 2025
La exposición a agentes nocivos induce roturas monocatenarias y bicatenarias en el ADN celular, lo que conduce a daños en el ADN.
Para detectar daños en el ADN, comience con una suspensión unicelular de células tratadas químicamente en agarosa licuada de bajo punto de fusión. Cargue la suspensión en un portaobjetos de vidrio y deje que la agarosa se solidifique, lo que permite la inmovilización de las células dentro de la matriz de gel poroso.
Trate las células con tampón de lisis. Los detergentes en el tampón solubilizan las membranas celulares y nucleares, mientras que las sales eliminan las histonas del ADN, formando un cuerpo nucleoide que contiene ADN unido a la matriz nuclear.
Incube los portaobjetos en un tampón de electroforesis alcalina. Esto hace que el ADN se desenrolle y genere fragmentos monocatenarios. Coloque el portaobjetos en un aparato de electroforesis y conéctelo a la fuente de alimentación. Esto permite la migración de ADN cargado negativamente hacia el ánodo positivo.
El ADN no dañado permanece restringido dentro del cuerpo nucleoide. Por el contrario, los fragmentos de ADN más pequeños y dañados comienzan a moverse hacia el ánodo. Este movimiento diferencial
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