Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:04 min. • July 8th, 2025
Los transportadores de aminoácidos son proteínas unidas a la membrana que median la transferencia de aminoácidos a través de las membranas celulares, regulando los procesos celulares vitales.
Para estudiar la absorción de aminoácidos in vitro, tome un cultivo de células estromales derivadas de la médula ósea de ratón. Aspirar el medio de cultivo. Agregue un tampón precalentado complementado con glutamina, un aminoácido, marcado con hidrógeno radiactivo. Incubar durante el tiempo requerido.
El tampón precalentado proporciona la temperatura fisiológica y el pH adecuado necesarios para la absorción celular de glutamina. Los transportadores de glutamina consisten en dominios de transporte, responsables de la translocación del sustrato a través del cotransporte acoplado a iones de sodio, y dominios de andamio anclados a la membrana.
El dominio de transporte se une a la glutamina radiomarcada junto con los iones de sodio del tampón. Al unirse, libera las moléculas en el citoplasma. Simultáneamente, el dominio de transporte transloca iones de sodio intracelulares y aminoácidos neutros fuera de la célula, lo que da como resultado la homeostasis celular.
Lave las células con tampón helado,
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