Ensayo colorimétrico para la cuantificación de lactato en muestras de ensayo

En las células vivas, en condiciones anaeróbicas, la enzima lactato deshidrogenasa convierte el piruvato, un producto final de la glucólisis, en lactato, un metabolito clave. La cantidad de lactato producido en las células refleja su estado metabólico.

Para cuantificar la concentración de lactato intracelular, comience con una muestra de prueba de lisado de células de nematodos sin proteínas. Complemente otros pocillos de una placa de pocillos múltiples con una solución de lactato de varias concentraciones conocidas.

El lisado carece de todas las enzimas proteicas, incluida la lactato deshidrogenasa endógena, lo que garantiza una cuantificación precisa del lactato.

Agregue un tampón de ensayo de lactato en cada pocillo para mantener el pH adecuado para una actividad enzimática óptima. Complemente los pocillos con una mezcla de reacción que contenga la enzima lactato deshidrogenasa, el dinucleótido de nicotinamida-adenina (NAD), una coenzima y una sonda colorimétrica e incube.

Durante la incubación, la lactato deshidrogenasa cataliza la oxidación del lactato celular a piruvato, con una reducción simultánea de NAD a NADH. El NADH generado reacciona con la sonda colorimétrica para pro