Ensayo de piruvato para la estimación de los niveles de piruvato en fracciones celulares de gusanos

Los niveles celulares de piruvato, un intermediario clave en las vías bioquímicas productoras de energía, se pueden estimar mediante ensayos colorimétricos basados en enzimas.

Para determinar los niveles de piruvato en las células de Caenorhabditis elegans, un nematodo no parasitario, tome una fracción celular preparada a partir de gusanos adultos que contienen piruvato. Trate la solución, elimine las proteínas celulares y recolecte la fracción celular clarificada, la muestra de prueba, que contiene piruvato. La ausencia de proteínas celulares garantiza una determinación precisa de los niveles de piruvato.

Comience agregando un reactivo de trabajo que contenga las enzimas piruvato oxidasa y peroxidasa de rábano picante, y un colorante cromogénico. Incube la mezcla en la oscuridad durante un tiempo adecuado.

Durante la incubación, la piruvato oxidasa reacciona con el piruvato, su sustrato, generando peróxido de hidrógeno como subproducto. La ausencia de luz evita la descomposición espontánea del peróxido de hidrógeno.

La peroxidasa de rábano picante cataliza la reacción entre el peróxido de hidrógeno y el colorante cromogénico, produciendo un producto coloreado. La intensidad del pr