Ensayo espectrofotométrico para determinar la actividad de la glucógeno sintasa

0 visualizaciones • 4:00 min. • July 8th, 2025

La glucógeno sintasa, una enzima crucial en la síntesis de glucógeno, escinde la glucosa difosfato de uridina, o glucosa UDP, un azúcar nucleótido, en UDP y residuos de glicosilo y agrega el monómero de glucosa liberado a la cadena de glucógeno en crecimiento.

Para estimar la actividad de la glucógeno sintasa, comience tomando una mezcla de reacción que contenga glucógeno, UDP-glucosa, ATP, fosfoenolpiruvato y dinucleótido de nicotinamida y adenina, o NADH, en un tubo. Agregue la enzima quinasa nucleósido difosfato o NDP y un cóctel de enzimas piruvato quinasa y lactato deshidrogenasa. Mezcle el contenido e incube.

Agregue una muestra que contenga glucógeno sintasa al tubo para iniciar la reacción enzimática.

La glucógeno sintasa actúa sobre la glucosa UDP, generando UDP y un residuo de glicosilo. La enzima absorbe el monómero de glucosa libre y lo incorpora a la cadena de glucógeno de la mezcla de reacción. En presencia de ATP, la quinasa NDP de la mezcla de reacción fosforila el UDP no utilizado, convirtiéndolo en UTP y generando ADP.

La enzima piruvato quinasa actúa sobre el ADP y agrega un fosfato donado por el fosfoenolpiruvato de la mezcla de reacción para producir ATP y piru

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Absorbancia de NADH