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Técnicas biológicas
0 vistas • 2:52 min • July 8th, 2025
Los virus se unen al receptor de la célula huésped y se internalizan en un endosoma. La membrana endosomal se fusiona con la membrana viral, liberando contenido viral dentro de la célula.
Al llegar al núcleo, el genoma viral se transcribe en ARNm y luego se traduce para formar proteínas virales. Los componentes virales ingresan al citoplasma y se ensamblan en viriones, que se pellizcan fuera de la célula y causan efectos citopáticos: cambios en la morfología de la célula huésped y la muerte.
Para evaluar la cinética de supervivencia del virus midiendo la impedancia de la célula huésped, tome una placa multipocillo recubierta con microelectrodos de medición de impedancia en su parte inferior. Agregue una suspensión de células huésped a los pocillos e incube para permitir que las células se adhieran a la superficie del electrodo y crezcan.
A continuación, tome suspensiones virales pretratadas con solución salina con diferentes cargas virales. El tratamiento con solución salina suministra cloruro al virus, que produce ácido hipocloroso que lo mata, reduciendo la infectividad viral. Agregue estas suspensiones virales en sus respectivos pocillos.
Mida la impedancia celular, un fenómeno de oposición al flujo de corriente eléctrica a través de los electrodos, por las células adherentes.
Los virus infectan las células huésped adherentes y cambian su morfología, provocando el desprendimiento de las células transformadas de los electrodos. Con el tiempo, a medida que se infectan más células, la impedancia celular mediada por la célula huésped disminuye.
Grafique el índice celular, que es el cambio en la impedancia debido al desprendimiento de células infectadas, a lo largo del tiempo.
Para evaluar la cinética de supervivencia del virus de la influenza A, agregue cloruro de sodio a una concentración final de 35 gramos por litro en agua destilada y agregue 900 microlitros de la solución salina resultante a criotubos de 2 mililitros. Agregue 100 microlitros de caldo viral a cada criotubo y coloque los tubos en la incubadora a 35 grados Celsius, durante el período de tiempo experimental apropiado.
El día antes del final de la incubación, siembre 3 x 104 células MDCK recién divididas en 100 microlitros de medio de propagación de virus por pocillo, en una placa de microtitulación de 16 pocillos, y repita los pasos que permiten medir la impedancia de fondo y la distribución uniforme de las células en el fondo de los pocillos. Luego, cultive las células durante 24 horas a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono.
Al día siguiente, lave las células dos veces, luego infecte las células con 100 microlitros del virus destilado con solución salina, diluido 10 veces en medio de cultivo fresco, como se demostró, y controle la impedancia celular cada 15 minutos durante al menos 100 horas.