Ensayo de complementación de luciferasa dividida para identificar interacciones específicas proteína-proteína

Las interacciones proteína-proteína son cruciales para las funciones celulares vitales.

Para estudiar las interacciones entre las proteínas transmembrana, proteínas de membrana que abarcan la bicapa lipídica de la membrana celular, comience con los pocillos de una placa de pocillos múltiples que contenga un cultivo de células de mamíferos adherentes.

A continuación, agregue una solución que contenga un agente de transfección adecuado y un par de plásmidos de expresión.

Uno de los plásmidos de expresión codifica una proteína transmembrana de interés fusionada con el pequeño fragmento no funcional de la enzima luciferasa; el otro plásmido codifica una segunda proteína transmembrana de interés fusionada con el gran fragmento no funcional de la enzima luciferasa.

Incuba el plato. El agente de transfección facilita la captación celular de los plásmidos de expresión.

Las células transfectadas con éxito expresan las proteínas transmembrana. La interacción entre las proteínas transmembrana expresadas acerca los fragmentos pequeños y grandes que se enfrentan al citoplasma, lo que hace que se unan y formen la enzima luciferasa activa.

Reemplace el medio en los pocillos con medios sin suero p