Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 2:30 min. • July 8th, 2025
La reacción en cadena de la polimerasa en gradiente es una técnica para optimizar la temperatura de recocido a la que los cebadores (ADN monocatenario específico de secuencia) se unen a los sitios complementarios en el ADN molde.
Tome una mezcla que contenga cebadores directos e inversos, dNTP y ADN polimerasa termoestable en un tampón apropiado. Agregue el ADN molde y transfiera los componentes a una placa de PCR.
Coloque la placa en un termociclador de gradiente con un bloque calefactor especializado. Esto establece un gradiente lineal de temperatura de recocido entre el rango de 55 °C a 65 °C, con un incremento constante de temperatura en toda la placa.
La reacción calienta la placa a alta temperatura, desnaturalizando el ADN bicatenario en hebras simples y activando la ADN polimerasa. Posteriormente, se baja la temperatura según los valores programados en cada pocillo, facilitando el recocido del cebador.
A una temperatura de recocido por debajo del óptimo, los cebadores se unen de forma no específica al ADN desnaturalizado, lo que lleva a una amplificación no específica durante la reacción de PCR. A una temperatura superior a la óptima, cantidades insuficientes de los cebadore
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