Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 8:45 min. • July 8th, 2025
La reacción en cadena de la polimerasa digital dúplex (ddPCR) permite la detección cuantitativa simultánea de dos marcadores genéticos distintos.
Para comenzar, tome una muestra que contenga dos secuencias objetivo diferentes. Agregue una mezcla que contenga una enzima ADN polimerasa termoestable, dNTP y cebadores específicos para objetivos. A continuación, agregue dos sondas de oligonucleótidos específicas para objetivos diferentes, marcadas con reporteros fluorescentes y una molécula extintora para detectar objetivos amplificados.
La solución se emulsiona con aceite para dividir las secuencias objetivo en numerosas nanogotas. Cada gota que contiene el objetivo actúa como un recipiente de reacción individual.
Inicie el proceso de ciclo térmico para la reacción de amplificación dentro de las nanogotas individuales.
A una alta temperatura de desnaturalización, los objetivos bicatenarios se separan en hebras simples.
Baje la temperatura para alcanzar la temperatura de recocido adecuada, permitiendo que los cebadores y las sondas de oligonucleótidos se unan a la plantilla.
La proximidad del apagador suprime la fluorescencia del reportero. A la temperatura de extensión, la ADN polimera
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