Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:08 min. • July 8th, 2025
La PCR cuantitativa de transcripción inversa en tiempo real es útil para identificar infecciones virales.
Comience con una muestra que contenga el ARN viral objetivo. Agregue cebadores específicos para objetivos, que ayudan tanto en la síntesis como en la amplificación del ADN, junto con la enzima transcriptasa inversa y los dNTP.
Agregue ADN polimerasa termoestable, una enzima para amplificar el ADN a través de los ciclos de PCR, y SYBR green, un tinte que se intercala en ADN de doble cadena, dsDNA. Coloque la reacción en un termociclador. Establezca una temperatura adecuada para que los cebadores se unan al ARN objetivo.
La transcriptasa inversa agrega dNTP al cebador mientras escinde simultáneamente el ARN molde, sintetizando ADNc.
Aumentar la temperatura, inactivando la transcriptasa inversa. Baje la temperatura, permitiendo que los cebadores se recocan en el ADNc para su posterior amplificación. Aumente la temperatura para alcanzar el paso de extensión, donde la ADN polimerasa extiende los cebadores, sintetizando dsDNA.
Los ciclos consecutivos dan como resultado una amplificación exponencial de dsDNA. El verde SYBR se une al ADN en cantidades cada vez mayores, lo que provoca u
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